De Mesdag Collectie presenteert de unieke kunstverzameling van de internationaal gevierde kunstenaars Hendrik Willem Mesdag en Sientje Mesdag-van Houten. In de tweede helft van de negentiende eeuw brachten zij een belangwekkende collectie schilderijen, tekeningen en kunstnijverheid bijeen, die nog steeds in zijn historische omgeving te zien is aan de Laan van Meerdervoort in Den Haag.
Het museum is beroemd om de collectie Franse meesterwerken van de schilders van Barbizon, een van de grootste en belangrijkste ter wereld, en de indrukwekkende verzameling schilderijen, aquarellen en tekeningen van de Haagse School.